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禽流感病毒通用熒光RT- PCR檢測的操作方法，適用于活禽及其產(chǎn)品中禽流感病毒的檢驗。

樣品采集
活禽取咽喉拭子和泄殖腔拭子，采集方法如下:取咽喉拭子時將拭子深人喉頭口及上顎裂來回刮3次一5次取咽喉分泌液;取泄殖腔拭子時將拭子深人泄殖腔轉一圈并沾取少量糞便;將拭子一并放人盛有1.0mLPBS的1.5mL Eppendorf管中，加蓋、編號。

肌肉或組織臟器?待檢樣品裝人一次性塑料袋或其他滅菌容器，編號，送實驗室。

血清、血漿?用無菌注射器直接吸取至無菌印pendorf管中，編號備用。

樣品貯運
樣品采集后，放人密閉的塑料袋內(一個采樣點的樣品，放一個塑料袋)，于保溫箱中加冰、密封，送實驗室。

樣品制備
咽喉、泄殖腔拭子樣品在混勻器上充分混合后，用高壓滅菌鑷子將拭子中的液體擠出，室溫放 置30min,取上清液轉人無菌的1.5m L印pendorf管中，編號備用樣品存放制備的樣本在2 `C -8`C條件下保存應不超過24h,若需長期保存應置一70`C以下，但應避免反復凍融（凍融不超過三次)。

試劑準備

在反應混合物配制區(qū)進行從試劑盒中取出相應的熒光RT-PCR反應液,Taq酶，在室溫下融化后，2000r/min低速離心機離心5s。設所需熒光RT-PCR檢測總數(shù)為n,其中n為被檢樣品、為陽性對照與陰性對照的和。